文章目录

1 材料

1.1 细胞与动物

1.2 药品及试剂

1.3 实验仪器

2 实验方法

2.1 造模与分组

2.2 小鼠肺组织病理学检测

2.3 流式细胞仪检测肺组织中MDSCs、M1及M2型TAMs细胞水平

2.4 ELISA法检测血清IL-4、IL-10浓度

2.5 实时荧光PCR检测

2.6 Western blot检测

2.7 统计学方法

3 结果

3.1 造模小鼠大体及肺组织HE染色结果

3.2 各组小鼠肺组织中MDSCs、M1及M2型TAMs细胞百分比比较

3.3 各组小鼠血清中IL-4、IL-10水平

3.4 各组小鼠肺组织中iNOS、Arg mRNA表达水平

3.5 各组小鼠肺组织中PD-1、PD-L1、PI3K、C/EBPβ表达水平

4 讨论

文章摘要:目的:观察肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠肿瘤浸润性髓样细胞MDSCs、TAMs的调控作用。方法:选取C57BL/6雄性小鼠建立Lewis肺癌小鼠模型,成模小鼠随机分为模型组、肺岩宁低剂量组、肺岩宁高剂量组,每组8只,另取8只正常小鼠为空白组。空白组、模型组:0.4 mL生理盐水灌胃,每日1次;肺岩宁低剂量组:0.4 mL 40 g/（kg·d）肺岩宁方灌胃,每日1次;肺岩宁高剂量组:0.4 mL 80 g/（kg·d）肺岩宁方灌胃,每日1次。14 d后处死小鼠,剥取肺组织,收集外周血,流式细胞术检测小鼠肺组织MDSCs、M1及M2型TAMs细胞百分比;酶联免疫吸附（ELISA）法检测小鼠外周血IL-4、IL-10表达水平;实时荧光PCR法检测小鼠肺组织中iNOS、Arg-1 mRNA表达水平;免疫印迹法（Western Blot）检测小鼠肺组织PD-1、PD-L1、PI3K、C/EBPβ表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠肺组织中M1型TAMs百分比显著降低（P<0.05）,M2型TAMs、MDSCs百分比显著上升（P<0.05）;与模型组相比,肺岩宁低、高剂量组小鼠肺组织中M1型TAMs细胞百分比显著上升（P<0.05）,M2型TAMs、MDSCs百分比显著降低（P<0.05）。与空白组相比,模型组、肺岩宁低、高剂量组小鼠血清中IL-4、IL-10水平显著升高（P<0.05）;与模型组相比,肺岩宁低、高剂量组小鼠血清中IL-4、IL-10水平显著降低（P<0.05）;与肺岩宁低剂量组相比,高剂量组小鼠血清中IL-4、IL-10水平显著降低（P<0.05）。与空白组相比,模型组小鼠肺组织中iNOS mRNA水平显著降低,Arg-1 mRNA水平显著升高（P<0.05）;与模型组相比,肺岩宁低、高剂量组小鼠肺组织中iNOS mRNA水平上升,Arg-1 mRNA水平显著降低（P<0.05）。与空白组相比,模型组、肺岩宁低剂量组小鼠肺组织中PD-1、PD-L1、PI3K表达增加（P<0.05）,模型组小鼠肺组织中C/EBPβ表达增加（P<0.05）;与模型组相比,肺岩宁高剂量组小鼠肺组织中PD-1、PD-L1、PI3K、C/EBPβ表达下调（P<0.05）,肺岩宁低剂量组小鼠肺组织中PD-L1表达下调（P<0.05）;与肺岩宁低剂量组相比,肺岩宁高剂量组小鼠肺组织中PD-L1表达下调（P<0.05）。结论:肺岩宁方具有抑制肺癌组织中肿瘤浸润性髓样细胞MDSCs、M2型TAMs增殖,促使TAMs表型向M1型转变,同时调控MDSCs、TAMs功能蛋白iNOS、 Arg-1的合成,下调免疫负向调节因子IL-4、IL-10水平的作用,其内在机制可能通过抑制PD-1/PD-L1、PI3K/C/EBPβ信号通路,发挥改善肿瘤免疫抑制,重塑肿瘤免疫微环境的作用。

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