文章目录

1 资料与方法

1.1 临床资料：

1.2 细胞和试剂：

1.3 方法

    1.3.1 实时定量聚合酶链式反应（real-time quantita-tive polymerase chain reaction,RT-qPCR）

    1.3.2 细胞培养和照射处理：

    1.3.3 细胞转染：

    1.3.4 CCK-8法检测细胞增殖活性：

    1.3.5 克隆形成实验检测细胞集落形成：

    1.3.6 流式细胞术检测细胞凋亡：

    1.3.7 蛋白质印迹法检测细胞中Cleaved-caspase3表达：

    1.3.8 双荧光素酶报告基因实验：

1.4 统计学分析：

2 结果

2.1 circ＿DONSON和miR-671-5p在肺癌组织中的表达及其与患者临床指标之间的关系分析：

2.2 X-ray对肺癌细胞A549中circ＿DONSON和miR-671-5p表达的影响：

2.3 沉默circ＿DONSON对肺癌细胞增殖凋亡的影响：

2.4 沉默circ＿DONSON靶向调控miR-671-5p:

2.5 过表达miR-671-5p对X-ray处理的肺癌细胞增殖和凋亡的影响：

2.6 抑制miR-671-5p降低沉默circ＿DONSON对X-ray处理的肺癌细胞增殖和凋亡的影响：

3 讨论

文章摘要:目的:探讨circ_DONSON对肺癌细胞放射敏感性的影响及可能机制。方法:收集43例肺癌组织和癌旁组织,实时定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RTqPCR）法检测组织中circ_DONSON和微小RNA-671-5p（microRNA-671-5p,miR-671-5p）表达。体外培养肺癌细胞A549,经不同剂量（2 Gy、4 Gy）X-ray照射后,RT-qPCR法检测细胞中circ_DONSON和miR-671-5p表达。分别转染si-NC、si-circ_DONSON、miR-NC、miR-671-5p mimic,或共转染sicirc_DONSON与miR-671-5p inhibitor至A549细胞,再用4 Gy X-ray照射后,细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞集落形成数,蛋白质印迹法检测细胞中活化的半胱天冬酶-3（Cleaved-caspase3）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_DONSON与miR-671-5p调控关系。结果:肺癌组织中circ_DONSON的表达量为4.27±0.38,高于癌旁组织中circ_DONSON的表达量（0.80±0.13,P<0.05）,而miR-671-5p的表达量为0.37±0.07,低于癌旁组织中miR-671-5p的表达量（0.37±0.07,P<0.05）。与对照组比较,肺癌细胞A549经不同剂量（2 Gy、4 Gy）X-ray照射后,细胞中circ_DONSON表达升高（3.07±0.142 Gy/3.69±0.124 Gy比1.00±0.00,P<0.05）,而miR-671-5p表达降低（0.23±0.022 Gy/0.45±0.034 Gy比1.00±0.00,P<0.05）。与对照组或转染si-NC的A549细胞比较,转染si-circ_DONSON的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.48±0.04比1.04±0.11、1.01±0.09;（41.33±1.70）个比（85.67±2.05）个、（86.33±1.25）个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[（31.18±1.39）%比（14.24±0.80）%、（14.30±0.84）%;0.90±0.06比0.41±0.04、0.40±0.05;P<0.05]。与对照组或转染miR-NC的A549细胞比较,转染miR-671-5p mimic的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.63±0.05比1.01±0.11、1.00±0.11;（52.67±2.05）个比（85.00±2.45）个、（84.00±1.63）个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[（28.22±1.47）%比（14.42±0.88）%、（14.61±1.02）%;0.77±0.04比0.40±0.03、0.41±0.05;P<0.05]。circ_DONSON可靶向结合miR-671-5p,且转染si-circ_DONSON的A549细胞中miR-671-5p表达明显高于转染si-NC的细胞（4.66±0.21比1.00±0.02,P<0.05）。与转染si-circ_DONSON的A549细胞比较,共转染si-circ_DONSON与miR-671-5p inhibitor的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数升高[0.91±0.06比0.50±0.04;（71.00±2.83）个比（40.67±2.49）个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均降低[（20.66±0.96）%比（31.13±1.57）%;0.57±0.03比0.90±0.07;P <0.05]。结论:沉默circ_DONSON可能通过靶向上调miR-671-5p增强肺癌细胞A549的放射敏感性。

文章关键词:

论文分类号:R734.2