文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞株及培养

1.2 药品、试剂与仪器

1.3 观察指标与方法

    1.3.1 CCK-8细胞毒性检测实验观察不同浓度甘草素对A549细胞增殖的影响

    1.3.3 细胞转染与分组

    1.3.4 CCK-8法检测细胞活力

    1.3.5 流式细胞术检测细胞凋亡情况

    1.3.6 定量聚合酶链反应（qPCR）法检测细胞miR-21、MEG2 mRNA相对表达量

    1.3.7 双荧光素酶报告基因实验验证mi R-21与MEG2的靶向关系

    1.3.8蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞MEG2蛋白表达水平

1.4统计方法

2 结果

2.1 不同浓度甘草素对A549细胞增殖的影响

2.2 甘草素对A549细胞放疗敏感性的影响

2.3 各组A549细胞相对活力比较

2.4 各组A549细胞凋亡率比较

2.5 各组A549细胞miR-21和MEG2 mRNA相对表达量比较

2.6 miR-21与MEG2的靶向关系

2.7 各组A549细胞MEG2蛋白相对表达量比较

3 讨论

文章摘要:【目的】探讨甘草素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞放疗敏感性的作用及机制。【方法】体外培养NSCLC细胞株A549。使用不同浓度甘草素处理,筛选20%抑制浓度（IC20）的甘草素浓度。经甘草素处理后,克隆形成实验观察细胞放疗敏感性,选择半数细胞存活分数（SF）对应的放射线剂量进行后续实验。A549细胞随机分为对照组、甘草素组、miR-21 mimics-NC组、miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组。miR-21 mimics-NC组转染miR-21模拟物阴性对照,miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组转染miR-21模拟物,24 h后观察转染效果,甘草素组、甘草素+miR-21 mimics组加入0.2 mmol/L甘草素作用24 h、4 Gy 6 MV-X射线照射3 h进行后续实验。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-21、蛋白络氨酸磷酸酶MEG2 mRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与MEG2的靶向关系;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测MEG2蛋白相对表达量。【结果】选取甘草素浓度为0.2 mmol/L,甘草素处理后,A549细胞SF降低（P<0.05）,放射增敏比>1。与对照组比较,甘草素组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 m RNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）;与甘草素组比较,miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）;与miR-21 mimics-NC组比较,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）;与miR-21 mimics组比较,甘草素+miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-21直接靶向MEG2。【结论】甘草素可以抑制NSCLC细胞增殖,促进细胞凋亡及增强放疗敏感性,其机制可能与调控miR-21对MEG2转录和翻译的抑制有关。

文章关键词:

论文DOI:10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2022.02.030

论文分类号:R285