文章目录

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 方法

    1.2.1 细胞培养

    1.2.2 细胞转染实验

    1.2.3 实时荧光定量PCR检测miR-100-5p与mTOR的相对表达检测

    1.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡情况

    1.2.5 Western印迹

    1.2.6 靶基因预测及双荧光素酶报告基因测定

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 A549细胞中miR-100-5p和mTOR的相对表达情况

2.2 miR-100-5p诱导A549细胞凋亡

2.3 转染后细胞中自噬相关基因蛋白表达情况

2.4 mTOR是miR-100-5p的靶基因

3 讨 论

文章摘要:目的探讨miR-100-5p靶向调控mTOR信号通路对人非小细胞肺癌A549细胞自噬的影响。方法采用A549细胞,实验设置对照组、转染miR-100-5p mimics组、转染miR-100-5p inhibitor组及其对应的无义核酸序列组（mimics NC和inhibitor NC）,通过Real time-PCR检测各组细胞中miR-100-5p及自噬相关基因mTOR、Beclin1、LC3及Bcl-2 mRNA相对表达水平;流式细胞术检测瞬时转染后各组细胞的凋亡情况;Western印迹检测miR-100-5p mimics转染48 h后A549细胞中自噬蛋白mTOR的表达情况;最后,通过预测软件结合双荧光素酶报告实验验证miR-100-5p和mTOR之间的靶向关系。结果 A549细胞经过瞬时转染后,对照组、mimics NC组、inhibitor NC组的miR-100-5p、自噬相关基因mTOR、Beclin1、LC3和Bcl-2表达量差异无统计学意义（P>0.05）,与mimics NC组比,mimics组miR-100-5p、自噬相关基因表达量显著上调（P<0.05）,与inhibitor NC组比,inhibitor组miR-100-5p、自噬相关基因表达量显著下调（P<0.05）,与mimics组比,inhibitor组miR-100-5p、自噬相关基因表达量显著下调（P<0.05）。对照组、mimics NC组、mimics组、inhibitor NC组、inhibitor组A549细胞转染48 h细胞凋亡比例,各组差异有统计学意义（F=35.169,P<0.001）。mimics组A549细胞转染48 h细胞凋亡比例显著高于其余4组,差异有统计学意义（均P<0.05）。3组mTOR蛋白水平比较:mimics组>对照组>mimics NC组（均P<0.05）。结论 miR-100-5p靶向mTOR调控A549细胞自噬促进细胞凋亡,提示miR-100-5p可作为肺癌的临床治疗生物治疗的靶点。

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