文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞株、主要试剂和仪器

1.2 恶性转化BEAS-2B细胞模型的构建及鉴定

    ①克隆形成能力:采用平板克隆形成实验。

    ②迁移能力:采用划痕实验。

    ③增殖活性:采用MTT实验。

1.3 差异表达miRNA的筛选

1.4 差异表达mRNA的筛选

1.5 细胞中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521表达的检测

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 恶性转化BEAS-2B细胞模型的鉴定

2.2 差异表达mRNA与miRNA的筛选

2.3 差异表达mRNA的GO和KEGG分析结果

2.4 两组细胞中hsa-miR-2115-3p 和hsa-miR-4521表达的比较

3 讨论

文章摘要:目的:探索与苯并(a)芘[B(a)P]诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B细胞)恶性转化相关的miRNA和mRNA。方法:采用5 mg/L的B(a)P对BEAS-2B细胞进行染毒。取染毒和未染毒细胞,分别采用平板克隆形成实验、划痕实验、MTT法检测克隆形成能力、迁移能力和增殖活性;采用芯片技术检测miRNA和mRNA表达谱,以FC≥2.0且P<0.05为标准筛选出差异表达miRNA和mRNA,对其进行GO注释及KEGG通路分析。采用实时荧光定量PCR法检测两组细胞中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521的表达。结果:染毒组细胞克隆形成能力、迁移能力和增殖活性均明显增强(P<0.05)。芯片分析结果显示,染毒组和未染毒组细胞在不同的簇中;共筛选出127种差异表达miRNA(29种表达上调,98种表达下调)和159种差异表达mRNA(99种表达上调,60种表达下调)。GO注释及KEGG通路分析结果显示,差异表达mRNA可能参与了细胞活素-受体相互作用介导的信号通路、p53信号通路介导的细胞凋亡等。染毒组细胞中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521的表达低于未染毒组(P<0.05),与芯片结果一致。结论:筛选出B(a)P诱导BEAS-2B恶性转化相关的miRNA和mRNA。

文章关键词:

项目基金:国家自然科学基金项目(81172717),

论文作者:栗振凯¹ 李中秋¹ 孟丽雅¹ 张佳彤² 张巧¹ 

作者单位:1. 郑州大学公共卫生学院卫生毒理学教研室 2. 郑州大学医院疾病预防控制科 

论文DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2021.01.040

论文分类号: R114;R734.2

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