中药学论文_地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗
文章摘要:目的:观察地参多糖(Lycopus lucidus Polysaccharide,LLP)的体外抗肿瘤活性及机制。方法:细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测LLP(0,5,10,15,20 g·L-1)对A549细胞不同时间(24 h,48 h,72 h)的增殖抑制作用;然后采用细胞划痕,transwell实验检测LLP(10,20 g·L-1)作用24 h和48 h后A549细胞的迁移侵袭能力;碘化丙啶(PI)单染法检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测LLP(10,20 g·L-1)诱导A549细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time-PCR)检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞中5个基因表达的影响:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),细胞周期依赖性激酶-1(CDK-1),细胞周期蛋白CyclinB1;蛋白免疫印记法(Western blot)检测LLP对A549细胞中10个蛋白表达的影响:Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X 蛋白(Bax),CDK-1,细胞周期依赖性激酶4(CDK-4),细胞周期依赖性激酶6(CDK-6),Cyclin B1,细胞周期蛋白Cyclin D1。结果:与空白组比较,LLP组A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05,P<0.01);G0/G1期比例升高(P<0.05);凋亡率升高(P<0.05,P<0.01);Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9的mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),CDK-1,Cyclin B1的mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bax 的蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2,CDK-1,CDK-4,CDK-6,Cyclin B1,Cyclin D1的蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:LLP可抑制A549细胞的增殖,使其周期阻滞在G0/G1期,同时可能包含G2/M期,并通过线粒体凋亡途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡。
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